بررسی تنوع ژنتیکی جمعیت گونه Anemone narcissiflora از تیره Ranunculaceae با استفاده از نشانگرهای مولکولیPCR - RAPD تحت word دارای 80 صفحه می باشد و دارای تنظیمات و فهرست کامل در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد بررسی تنوع ژنتیکی جمعیت گونه Anemone narcissiflora از تیره Ranunculaceae با استفاده از نشانگرهای مولکولیPCR - RAPD تحت word کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
فهرست مطالب
چکیده 2
پیش گفتار 3
فصل اول : کلیات وبررسی منابع
1-1 کلیاتی در مورد گیاه مورد مطالعه 5
1-1-1 رده بندی گیاه 5
1-1-2 گیاه شناسی راسته آلاله Ranunculales 6
1-1-3 گیاه شناسی تیره آلاله Ranunculacea 6
1-1-4 گیاه شناسی جنس Anemone 7
1-1-5 گیاه شناسی گونه Anemone narcissiflora 9
1-1-6 کلید شناسایی زیر گونه ها narcissiflora و willdenowii 10
1-1-7 اهمیت تیره آلاله 10
1-1-8 ترکبیات شیمیایی گیاهان تیره آلاله 12
1-2 مروری بر روش های نشانگر مولکولی در گیاهان 12
1-2-1 مارکرهای مولکولی 13
1-2-2 کاربردهای مارکر های DNA 19
1-3 واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR 21
1-3-1 مراحل PCR 23
1-3-2 کاربرد های PCR 23
1-4 تکنیک RAPD 24
1-4-1 اصل علمی تکنیک RAPD 25
1-4-2 کاربرد آنالیز های RAPD 26
1-4-3 الحاق نشانگر های ژنتیکی توسعه یافته به یک خصوصیت مورد مطالعه 26
1-4-4 جمعیت و توارث ژنتیکی 27
1-4-5 تکرار پذیری نشانگر های RAPD 28
1-4-6 مشاهدات پایانی 28
فصل دوم
مواد و روش ها
1-2 جمع آوری نمونه ها و آماده سازی آنها 31
2-2 استخراج DNA ژنومی از نمونه مورد مطالعه 34
2-2-1 محلول ها و بافر های لازم برای استخراج DNA 34
2-2-1-1 بافر استخراج 34
2-2-1-2 محلول CTAB / NACL 35
2-2-1-3 بافر CTAB Percipitation 35
2-2-1-4 بافر High Salt TE 36
2-2-1-5 کلروفورم – ایزوآمیل الکل (24:1) 36
2-2-2 مراحل استخراج DNA ژنومی از نمونه های گیاهی 36
2-3 بررسی کمیت و کیفیت DNA ژنومی استخراج شده 39
2-3-1 روش الکتروفورز 39
2-3-2 روش اسپکتروفتومتری 39
2-4 محلول ها و بافر های لازم برای الکتروفورز ژل آگارز 41
2-4-1 محلول بافر TBE (10X) 41
2-4-2 محلول بافر TBE (1X) 41
2-4-3 ژل آگارز 41
2-4-4 /DNA Sample Buffer DNA Loading 42
2-5 الکتروفورز ژل آگارز 42
2-6 واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) با آغازگرهای RAPD 43
2-6-1 مواد و وسایل لازم برای انجام PCR-RAPD 43
2-6-1-1 DFS Master MIX 43
2-6-1-2 آغازگرها 44
2-6-1-3 آب دیونیزه 44
2-6-1-4 DNA الگو 44
2-6-2 واکنش PCR-RAPD 45
2-6-1-2 آماده سازی واکنشگر PCR-RAPD 45
2-6-2-2 چرخه حرارتی PCR 45
2-7 تهیه ژل آگارز و الکتروفورز فرآورده های تکثیر شده 46
2-8 عکس برداری نمونه ها 48
2-9 تجزیه داده های RAPD 48
2-10 محاسبه فواصل ژنتیکی بر اساس داده های RAPD 49
فصل سوم
نتایج
3-1 کیفیت و کمیت DNA ژنومی استخراج شده 51
3-2 شرایط بهینه PCR –RAPD 52
3-2-1 غلظت واکنش گرهای PCR –RAPD 52
3-2-1-1 DNA ژنومی 52
3-2-1-2 پرایمرها 52
3-2-2 برنامه دمایی و زمانی بهینه جهت انجام PCR 53
3-3 الگوی باندی حاصل از PCR –RAPD 55
3-4 داده های حاصل از PCR –RAPD 55
فصل چهارم
4-1 نتیجه گیری کلی و بحث 72
پیشنهادات 74
فهرست شکل ها
شکل1-1 نقشه مکان اصلی گیاه مورد استفاده در این تحقیق 29
شکل 2-1 گل آذین های 1 تا 7 تایی 32
شکل 2-2 نمایی از پودر کردن مواد گیاهی 33
شکل 2-3 دستگاه نانودراپ برای تعیین کمیت DNA 40
شکل2-4 دستگاه ترموسایکلر 46
شکل 2-5 دستگاه الکتروفورز افقی 47
شکل 2-6 دستگاه ژل داک 48
شکل 3-1 الگوی باندی DNA ژنومی استخراج شده روی ژل 1 % 51
شکل 3-2 نمونه الگوی باندی حاصل از الکتروفورز محصول PCR-RAPD توسط پرایمرRP6 55
شکل3-3 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمر RP1 57
شکل3-4 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP2 59
شکل3-5 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP3 61
شکل 3-6 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP4 63
شکل 3-7 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP6 65
شکل3-8 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP7 67
شکل3 -9 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS کل پرایمر 70
فهرست جدول ها
جدول 2-1 مواد لازم برای تهیه بافر استخراج DNA ژنومی 34
جدول 2-2 مواد لازم برای تهیه بافر CTAB Percipitation 35
جدول 2-3 مواد لازم برای تهیه بافرHigh Salt TE 36
جدول 2-4 مواد لازم برای تهیه/ DNA Sample Buffer DNA Loading 42
جدول 2-5 نام وتوالی آغازگرهای RAPD 44
جدول 2-6 چرخه حرارتیPCR 45
جدول 3-1 نتایج نانودراپ 51
جدول 3-2 غلظت واکنش گرهای مربوط به پرایمر ها 52
جدول 3-3 دمای اتصال ودرصد GC مربوط به پرایمرها 53
جدول 3-4 برنامه، دما وزمان لازم جهت انجام PCR برای پرایمر هایRP1 ، RP2، RP3، RP4،RP6 ، RP7 54
جدول 3-5 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP1 56
جدول 3-6 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP1 56
جدول 3-7 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP2 58
جدول 3-8 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP2 58
جدول 3-9 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP3 60
جدول 3-10 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP3 60
جدول 3-11 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP4 62
جدول 3-12 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP4 62
جدول 3-13 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP6 64
جدول 3-14 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP6 64
جدول 3-15 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP7 66
جدول 3-16 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP7 66
جدول 3-17 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط کل پرایمرها 68
جدول 3-18 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط کل پرایمرها 69
فهرست مطالب
چکیده 1
فصل اول : کلیات وبررسی منابع 2
مقدمه 3
1-1 کلیاتی در مورد گیاه مورد مطالعه 5
1-1-1 رده بندی گیاه 5
1-1-2 گیاه شناسی راسته آلاله Ranunculales 5
1-1-3 گیاه شناسی تیره آلاله Ranunculacea 5
1-1-4 گیاه شناسی جنس Anemone 6
1-1-5 گیاه شناسی گونه Anemone narcissiflora 8
1-1-6 کلید شناسایی زیر گونه ها narcissiflora و willdenowii 8
1-1-7 اهمیت تیره آلاله 8
1-1-8 ترکبیات شیمیایی گیاهان تیره آلاله 9
1-2 مروری بر روش های نشانگر مولکولی در گیاهان 9
1-2-1 مارکرهای ژنتیکی 10
1-2-2 کاربردهای مارکر های DNA 14
1-3 واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR 15
1-3-1 مراحل PCR 17
1-3-2 کاربرد های PCR 17
1-4 تکنیک RAPD 18
1-4- 1کاربرد آنالیز های RAPD 18
1-4-2 الحاق نشانگر های ژنتیکی توسعه یافته به یک خصوصیت مورد مطالعه 19
1-4-3 جمعیت و توارث ژنتیکی 19
1-4-4 تکرار پذیری نشانگر های RAPD 20
1-4-5 ملاحظات پایانی 20
1-5 بررسی منابع 22
فصل دوم: مواد و روش ها 24
2-1 جمع آوری نمونه ها و آماده سازی آنها 25
2-2 استخراج DNA ژنومی از نمونه مورد مطالعه 28
2-2-1 محلول ها و بافر های لازم برای استخراج DNA 28
2-2-1-1 بافر استخراج 28
2-2-1-2 محلول CTAB / NACL 28
2-2-1-3 بافر CTAB Percipitation 28
2-2-1-4 بافر High Salt TE 29
2-2-1-5 کلروفورم – ایزوآمیل الکل (24:1) 29
2-2-2 مراحل استخراج DNA ژنومی از نمونه های گیاهی 30
2-3 بررسی کمیت و کیفیت DNA ژنومی استخراج شده 32
2-3-1 روش الکتروفورز 32
2-3-2 روش اسپکتروفتومتری 32
2-4 محلول ها و بافر های لازم برای الکتروفورز ژل آگارز 33
2-4-1 محلول بافر TBE (10X) 33
2-4-2 محلول بافر TBE (1X) 33
2-4-3 ژل آگارز 34
2-4-4 /DNA Sample Buffer DNA Loading 34
2-5 الکتروفورز ژل آگارز 34
2-6 واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) با آغازگرهای RAPD 35
2-6-1 مواد و وسایل لازم برای انجام PCR-RAPD 35
2-6-1-1 DFS Master MIX 35
2-6-1-2 آغازگرها 36
2-6-1-3 آب دیونیزه 36
2-6-1-4 DNA الگو 36
2-6-2 واکنش PCR-RAPD 36
2-6-1-2 آماده سازی واکنشگر PCR-RAPD 36
2-6-2-2 چرخه حرارتی PCR 37
2-7 تهیه ژل آگارز و الکتروفورز فرآورده های تکثیر شده 38
2-8 عکس برداری نمونه ها 39
2-9 تجزیه داده های RAPD 39
فصل سوم: نتایج 40
3-1 کیفیت و کمیت DNA ژنومی استخراج شده 41
3-2 شرایط بهینه PCR –RAPD 42
3-2-1 غلظت واکنش گرهای PCR –RAPD 42
3-2-1-1 DNA ژنومی 42
3-2-1-2 پرایمرها 42
3-2-2 برنامه دمایی و زمانی بهینه جهت انجام PCR 42
3-3 الگوی باندی حاصل از PCR –RAPD 44
3-4 داده های حاصل از PCR –RAPD 44
فصل چهارم: نتیجه گیری کلی و بحث 60
4-1 نتیجه گیری کلی و بحث 61
پیشنهادات 64
منابع 65
فهرست جدول ها
جدول 2-1 نمونه های مورد مطالعه و مشخصات گیاه شناسی 25
جدول 2-2 مواد لازم برای تهیه بافر استخراج DNA ژنومی 28
جدول 2-3 مواد لازم برای تهیه بافر CTAB Percipitation 29
جدول 2-4 مواد لازم برای تهیه بافرHigh Salt TE 29
جدول 2-5 مواد لازم برای تهیه/ DNA Sample Buffer DNA Loading 34
جدول 2-6 نام وتوالی آغازگرهای RAPD 36
جدول 2-7 چرخه حرارتیPCR 37
جدول 3-1 نتایج نانودراپ 41
جدول 3-2 غلظت واکنش گرهای مربوط به پرایمر ها 42
جدول 3-3 دمای اتصال ودرصد GC مربوط به پرایمرها 43
جدول 3-4 برنامه، دما وزمان لازم جهت انجام PCR برای پرایمر هایRP1 ، RP2، RP3، RP4،RP6 ، RP7 43
جدول 3-5 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP1 45
جدول 3-6 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP1 45
جدول 3-7 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP2 47
جدول 3-8 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP2 47
جدول 3-9 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP3 49
جدول 3-10 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP3 49
جدول 3-11 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP4 51
جدول 3-12 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP4 51
جدول 3-13 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP6 53
جدول 3-14 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP6 53
جدول 3-15 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط RP7 55
جدول 3-16 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط پرایمرRP7 55
جدول 3-17 کدگذاری بر اساس وجود یا عدم وجود باند توسط کل پرایمرها 57
جدول 3-18 ماتریس فاصله ژنتیکی برای نمونه های مورد مطالعه بر اساس الگوی باندی RAPD توسط کل پرایمرها 58
فهرست شکل ها
شکل1-1 نقشه مکان اصلی گیاه مورد استفاده در این تحقیق 21
شکل 2-1 گل آذین های 1 تا 7 تایی 26
شکل 2-2 نمایی از پودر کردن مواد گیاهی 27
شکل 2-3 دستگاه نانودراپ برای تعیین کمیت DNA 33
شکل2-4 دستگاه ترموسایکلر 37
شکل 2-5 دستگاه الکتروفورز افقی 38
شکل 2-6 دستگاه ژل داک 39
شکل 3-1 الگوی باندی DNA ژنومی استخراج شده روی ژل 1 % 41
شکل 3-2 نمونه الگوی باندی حاصل از الکتروفورز محصول PCR-RAPD توسط پرایمرRP6 44
شکل3-3 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمر RP1 46
شکل3-4 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP2 48
شکل3-5 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP3 50
شکل 3-6 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP4 52
شکل 3-7 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP6 54
شکل3-8 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS مربوط به پرایمرRP7 56
شکل3 -9 دندروگرام فاصله ژنتیکی نمونه مورد مطالعه و گروه بندی آنها بر اساس روش UPGMA به کمک نرم افزارNTSYS کل پرایمر 59
چکیده
گونه Anemone narcissiflora متعلق به جنس Anemone از تیره Ranunculaceae می باشد. این گونه دارای دو زیر گونه با نام های narcissiflora و willdenowii است که زیر گونه willdenowii در سال 89 برای ایران رکورد زده شد. به منظور مطالعه تنوع ژنتیکی گونه Anemone narcissiflora با استفاده از نشانگر مولکولی RAPD ، تعدادی نمونه از منطقه کوه کمر زنوز واقع در استان آذربایجان شرقی جمع آوری شد و تنوع ژنتیکی نمونه ها با استفاده از 6 آغازگر تصادفی 10 نوکلئوتیدی با روش PCR-RAPD بررسی شد. از 6 آغازگر به کار رفته در این تکنیک 39 باند پلی مورفیک تولید شد که بیشترین باند دهی مربوط به آغازگر RP1 و کمترین باند دهی مربوط به RP7 می باشد و متوسط باند دهی برای هر پرایمر 5/6 باند پلی مورفیک بود. آنالیز خوشه ای نمونه ها به روش UPGMA با استفاده از نرم افزار NTYSYSpc 2.02 انجام گرفت. دندروگرام حاصل از مهاجرت باندها نشان داد که نمونه های مورد مطالعه را می توان به دو گروه تقسیم کرد که گروه اول شامل نمونه های یک گلی و دو گلی و گروه دوم خود شامل دو زیر گروه می باشد که زیر گروه اول شامل نمونه های سه گلی، چهار گلی و پنج گلی و زیر گروه دوم شامل نمونه های شش و هفت گلی می باشد. نتایج حاصل از مقایسه و آنالیز داده های به دست آمده از تکنیک RAPD و ماتریس تشابه، نشان دهنده تنوع ژنتیکی بین نمونه های جمع آوری شده بود. این مطالعه نشان می دهد که نشانگر های RAPD می توانند پلی مورفیسم بین ژنوتیپ های مختلف Anemone narcissiflora و هیبرید های آنها را تعیین کنند. بنابراین تکنیک RAPD می تواند به عنوان یک روش مولکولی مناسب برای تعیین تنوع ژنتیکی نمونه های مورد مطالعه مورد استفاده قرار گیرد.
فصل اول
کلیات و بررسی منابع
مقدمه
گونه Anemone narcissiflora از تیره Ranunculaceae در سال 89 توسط اکرمی و مظفریان در مقاله ای با عنوان : A New Species Of Hedysarum (Fabaceae) And A New Record Of Anemone (Ranunculaceae) From NW IRAN برای ایران رکورد زده شده است و تا کنون تحقیقات مولکولی بر روی این گیاه صورت نگرفته است(11) .
جنسAnemone در جهان شامل 118 گونه می باشد که اکثر گونه ها ی آن در نیمکره شمالی هستند و در نواحی کوهستانی و سرد نیمکره جنوبی و نواحی با ارتفاع زیاد و نواحی مدیترانه ای نیز دیده می شود(8).
امروزه جهت تعیین تنوع ژنتیکی بین جمعیت های حفاظت شده علاوه بر شیوه سنتی که مبتنی بر خصوصیات مورفولوژیکی می باشد، از ابزار و نشانگر های نوین مولکولی از جمله نشانگرهای DNA استفاده می شود. لذا میزان چند شکلی بدست آمده از این نشانگرهای ژنتیکی، یکی از پارامترهای قابل ارزیابی برای مطالعه جمعیت ها و درک تفاوت های ژنتیکی بین آنها محسوب می شود. نشانگرهای DNA مبتنی برچند شکلی طبیعی درDNA هستند که اساس بهره برداری اهداف کاربردی را تشکیل می دهند( 1). نشانگر های DNA در مدت یک دهه از آغاز پیدایش، تکاملی شگرف و تحسین بر انگیز داشته اند. انواع مختلف نشانگر های DNA با تفاوت های زیادی از نظر تکنیکی و روش تولید، نحوه کاربرد، امتیاز بندی و تجزیه و تحلیل و تفسیر نتایج به سرعت ابداع و معرفی گردیدند. بدون تردید ابداع و معرفی واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR ) بیشترین نقش را در توسعه و تکامل نشانگر DNA داشته است. تکنیک RAPD بر مبنای PCR یکی از فن آوری های جدید نشاگر های DNA است که در سال 1990 ابداع گردیده است (32) .
به خاطر دقت، سرعت، نیاز به مقدار DNA ژنومی کم، عدم نیاز به شناخت ترادف خاصی از DNA ژنومی برای ساختن پرایمر، عدم نیاز به مواد نشاندار و صرف هزینه کم در تکنیک RAPD ، این تکنیک یکی از مارکرهای مناسب در مطالعه گیاهان می باشد، غالب بودن و عدم تکرار پذیری و همچنین عدم تشخیص سیستم آللی از معایب بزرگ آن می باشد ( 2 و 3).
عوامل مختلف محیطی می توانند بر روی ساختار ژنتیکی جمعیت های یک گونه گیاهی اثر داشته باشند. این مطالعه تنوع ژنتیکی جمعیت گونه Anemone narcissiflora رابا استفاده از تکنیک PCR-RAPD بررسی می کند.
هدف کلی از این تحقیق بررسی دقیق رده بندی فرو گونه ای جمعیت های مختلف Anemone narcissiflora در آذربایجان است که در صورت یافتن یک زیر گونه جدید، کلید شناسایی جدیدی برای زیر گونه نوشته خواهد شد.
1-1 کلیاتی در مورد گیاه مورد مطالعه
1-1-1 رده بندی
Kingdom : Plantae
Division : Magnoliophyta
Class : Magnoliopsida
Order : Ranunculales
Family : Ranunculaceae
Genus : Anemone
Species : Anemone narcissiflora L.
Sub Species : Anemone narcissiflora ssp.willdenowii
منابع
1- جداری کوهی ب، گروسی ق، حسینی ر. 1390 .بررسی تنوع ژنتیکی در ارقام بی دانه انگور توسط نشانگر ملکولی RAPD . مجله سلول و بافت ، جلد 2 :106-99.
2- حسین زاده کلاگر ا ، برزگر ع. 1387 .تنوع ژنتیکیAscochyta rabiei با استفاده از استاندارد نمودن RAPD. مجله علوم کشاورزی و منابع طبیعی ، جلد15 شماره اول.
3- سرخوش ع، زمانی ذ، فتاحی مقدم م، عبادی ع. 1384 .بررسی تنوع ژنتیکی برخی از ژنوتیپ های انار با استفاده از نشانگر (RAPD) . چهارمین همایش ملی بیو تکنولوژی جمهوری اسلامی ایران ،کرمان مرداد
4- طباطبایی م ، ملکی راد ع ا. 1388 . روش های تشخیص مولکولی در ژنتیک (ترجمه) .انتشارات نیک تهران. 152 صفحه.
5- طباطبایی م، عبدالهی م ر. 1388 . اصول زیست شناسی و ژنتیک (ترجمه). انتشارات نیک تهران. 248 صفحه.
6- قاسمی نژاد م ، بازوبندی م، کریمی شهری م. ر، نیکخواه م. ح. 1390 .بررسی تنوع ژنتیکی علف قناری(Phalaris minor Retz.) با استفاده از نشانگر های مولکولی RAPD . فصلنامه بوم شناختی علف های هرز ، جلد2، شماره1، ص: 1-10.
7- کریمی ه.87 13. فرهنگ رستنی های ایران.جلد2، انتشارات علوم کشاورزی ایران.91 صفحه.
8- مظفریان و.90 13. رده بندی گیاهان ، دو لپه ای ها. جلد2، انتشارات امیر کبیر تهران. ویرایش اول چاپ پنجم،610 صفحه.
9- نقوی م ، قره یاضی ب ، سالکده ق. 1384 .نشانگرهای مولکولی دانشگاه تهران. موسسه انتشارات و چاپ دانشگاه تهران. 360 صفحه.
10- یزدی صمدی ب ، ولی زاده م. 1380 .ژنتیک از دیدگاه مولکولی (ترجمه). انتشارات دانشگاه تهران. 447 صفحه.
11- Akrami S? Mozaffarian V? Maassoumi A? Nejadsattari T. 2011. A new species of Hedysarum (Fabaceae) and a new record of Anemone (Ranunculaceae) from NW IRAN. Iran. J. Bot. 17(1) :20-23. Tehran.
12- Bardakci F.2000. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers. Turk J Biol . 25(2001) : 185-196
13- Davis P.H. (Ed). 1985. flora of Turkey and the Aegean Island.? Edinburgh….
14- Dole J? Healy W. 1914 . Producting Anemone as a cut flower. Maryland Cooperative Extension. Fact Sheet 753.
15- Hoot S? Reznicek A. 1994. Phylogenetic Relationships in Anemone
(Ranunculaceae) based on morphology and chloroplast DNA. Systematic botany?19(1):pp.169-200.
16-Iranshahr M? Rechinger K H? Riedl H. 1992. Flora Iranica? Ranunculaceae – VOL.171. Akademische Druck und Verlagsanstalt? Graz Austria.
17- Ithaca NY. 2005. Herbalists View; Anemone for Pani Attacks.Northeast school of botanical medicine. P.O.Box 6626.
18- Iqbal MJ? Aziz N? Saeed NA? ZafarY? Malik KA. 1997. Genetic diversity evalution of some elite cotton varieties by RAPD analysis.Theor Appl Genet.94:139-144.
19- Jermyn J.2005. Alpine plants of Europe Timberpress.
20- Kadva Sh? Yadav M? Tiwari A. 2012. Genetic Analysis on Hibiscus Species by Using RAPD Markeras.International Journal of Biomedical and Advance Research.India.473-485.
21- Laura M? Lazzari B? Bobbio V? Caprera A? Borghi C? Strozzi F? Allavena A ? Stella A. 2011.De novo sequencing of Anemone coronaria transcriptome to discover putative genes involved in tranzechelia discolour infection response. Proceedings of the Joint Meeting AGI-SIBV-SIGA.Italy.ISBN 978-88-905470-2-9.
22- Meyer K? Hoot S? Arroyot M. 2010. Phylogenetic affinities of south american Anemone (Ranunculaceae),including the endemic segregate genera,barneoudia and oreithales. Int. J . Plant Sci.171(3):323-331.
23- Mohammad Rawashdeh I. 2011. Genetic diversity analysis of Achillea fragrantissima (Forskal) Schultz bip populations collected from different regions of jordan using RAPD markers. Jordan journal of biological sciences. P:21-28.
24- Naturalium R. 2009. Mutation dynamicc and phylogenetic utility of plastid introns and spacers in early branching eudicots. Institut For botanik angefertigt.
25- Ozdemir C? Altan Y? Baran P? Aktash K. 2008. Morphological and anatomical studies on medicinally and economically impotant Anemone narcissiflora L. subsp.narcissiflora (Ranunculaceae). Research journal of agricultur and biological sciences? 4(6):875-880.
26- Perveen A? Qaiser M. 2006. Pollen Flora of Pakistan-L. Ranunculaceae . Pak. J. Bot.? 38(3):499-509.
27- Romesburg HC. 1990.Cluster analysis for researchers. Krieyer publishing? malabar?FI? UA.
28- Semagn k? Bjornstad A, Ndjiondjop MN. 2006. An overview of molecular marker methods for plants . African journal of biotechnology.Vol. 5 (25) pp. 2549-2568.
29- Skoric M? Siler B? Banjanac T? Zivkovic J? Dmitrovic S? Misic D? Grubisic D. 2012.The reproducibility of RAPD profiles: Effects of PCR components on RAPD analysis of four centaurium species. Arch. Biol. Sci.? Belgrade? 64(1)? 191-199.
30- Sun M? Yin X? Shi F? Li L? Li M? Li L? Xiao H. 2012. Development of eighteen microsatellite markers in anemone amurensis (Ranunculaceae) and cross-amplification in congeneric species.Int. J. Mol. Sci. 13?4889-4895.
31- Verheyen K? Hermy M? Graa BJ. 2011. An intraspecific application of the leaf-height- seed ecology strategy scheme to forest herbs along a latitudinal gradient. Ghent University, Laboratory of Forestry.p:132-140.
32- Williams J? Kubelik A? Livak K? Raflski J? Tingey S.1990. DNA polymorphismsamplified by arbitrary primers are useful as genetic markers.Nucleic Acids Research? vol.18? No.22.
33- Ying C? Li SH. 2009. Molecular phylogeny of Ranunculaceae based on internal transcribed spacer sequences.African Journal of Biotechnology vol. 8(20)? pp.5215-5224.
34- Ziman S? Bulakh E? Tsarenko O. 2011. Anemone L. (Ranunculaceae): comparative morphology and taxonomy of the species from the Balkan flora.Botanica serbica 35(2):87-97.
Abstract
species of Anemone narcissiflora is belonged to Anemone genus of Ranunculaceae family. this species has two subspecies named narcissiflora and willdenowii which the latest is recorded in iran in 2010. some samples of Anemone narcissiflora is gathered from kuhkamar, zonouz region of east azarbayjan province, iran to study the genetic diversity of the species by using RAPD molecular markers, and estimation of genetic diversity were evaluated by using 6 random primers with 10 nucleotides by using PCR-RAPD method. 39 polymorphic bands were produced from the six primers used in this technique that the maximum band is related to the RP1 primer, the lowest band is related to the RP7 and the average band for all primers were 6.5 polymorphic bands. cluster analysis of samples in done by upgma method in ntysyspc 2.02 software. dendrogram resulting from migrating bands showed that the studied samples can be divided into two groups. the first group includes samples of one flower
and two flower and the second group consists of two sub-groups which the first subgroup consists of three flowers, four flowers and five flowers samples, and the second subgroup consists of six and seven flower samples. the results of the comparison and analysis of the data obtained from rapd technique and similarity matrix represents the genetic variation between collected samples. this study shows that rapd markers can determine the polymorphisms between different genotypes can of Anemone narcissiflora and their hybrids. so RAPD technique can serve as a suitable molecular method to determine the genetic diversity of samples.
Kay Words: Anemone narcissiflora, Genetic Diversity, RAPD-PCR
برای دریافت اینجا کلیک کنید
تعداد کل پیام ها : 0